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李時珍就這樣認真刻苦，一絲不茍地寫下了他的巨著《本草綱目》。由于他在書中批判了水銀“無毒”，久服“成仙”“長生”等說法，當時皇帝大臣都信道士們的水銀煉丹，所以這部著作大書商們都不敢出版，直到他死后于公元1596年才與讀者見面。出版后立即引起了巨大的反響，人們到處傳播它，并進行翻刻，成為醫生們的必備書籍。從17世紀起，《本草綱目》陸續被譯成日、德、英、法、俄等五國文字。1953年出版的《中華人民共和國藥典》，共收集531種現代藥物和制劑；其中采取《本草綱目》中的藥物和制劑就有100種以上。

英國生物學家達爾文稱《本草綱目》為“1596年的百科全書”！

2011年5月，金陵版《本草綱目》入選世界記憶名錄。